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  • 2020

    6-15

    標(biāo)準(zhǔn)菌株是屬于種屬鑒定的規(guī)范參照菌,而質(zhì)控菌株,往往是從功能或用途上講的,通常是以標(biāo)準(zhǔn)菌株用來(lái)做質(zhì)控的。標(biāo)準(zhǔn)菌株使用注意事項(xiàng):1、選擇合適的培養(yǎng)基:勿使用選擇性培養(yǎng)基。一般使用非選擇性的增菌培養(yǎng)基,因?yàn)槲⑸镌谶x擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)某些生物特性可能丟失,保藏的菌種的生物特性可能與標(biāo)準(zhǔn)菌株特性不同。2、菌液的濃度:菌液的濃度一般越大,菌種保存時(shí)間越長(zhǎng)。保藏時(shí)細(xì)菌常使用菌液,霉菌常用無(wú)菌水或生理鹽水制備成的孢子懸液。3、甘油濃度:甘油終濃度一般為10%~20%。由于甘油原液太粘稠,需...

  • 2020

    6-15

    菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料,在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,診斷制品的制備,菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究。1、梭氏法將容有1滴細(xì)胞懸液的小管﹐置于盛有氫氧化鉀或五氧化二磷吸水劑的大試管中﹐用真空泵抽至1、3帕?xí)r﹐將大試管密封保存。這是為減少細(xì)胞死亡率而采取的一種不經(jīng)凍結(jié)﹑緩慢脫水的干燥保藏法﹐適用于多種細(xì)菌﹑真菌。2、冷凍真空干燥法將細(xì)胞懸液每0、1~0、2毫升注入一無(wú)菌安瓿瓶﹐于-40℃預(yù)凍1小時(shí)﹐再于-20~30℃﹑真空度為13、3帕的條件下脫水。在脫水過(guò)程后期﹐安瓿瓶外溫...

  • 2020

    4-20

    所有體外培養(yǎng)細(xì)胞,包括初代培養(yǎng)及各種細(xì)胞系,當(dāng)生長(zhǎng)達(dá)到一定密度后,都需做傳代處理。傳代的頻率或間隔與培養(yǎng)液的性質(zhì)、接種細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞增殖速度等有關(guān)。接種細(xì)胞數(shù)量大、細(xì)胞基數(shù)大、相同增殖速度條件下,細(xì)胞數(shù)量增加與飽和速度相對(duì)要快(實(shí)際上細(xì)胞接種數(shù)量大時(shí)細(xì)胞增殖速度比稀少時(shí)要快)。連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系比初代培養(yǎng)細(xì)胞增殖快,培養(yǎng)液中血清含量多時(shí)細(xì)胞增殖比少時(shí)快。以上情況都會(huì)縮短傳代時(shí)間。所謂細(xì)胞“一代”一詞,系僅指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)時(shí)的一段時(shí)間,這已成為培養(yǎng)工作中的一種習(xí)慣說(shuō)...

  • 2020

    4-11

    細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別,列表說(shuō)明我來(lái)答這么龍厄爾尼諾LV.12019-02-24聊聊細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別:一、概念不同1、細(xì)胞株:細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株(CellStrain)。2、細(xì)胞系:細(xì)胞系(cellline)指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)*傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。二、形成方法不同1、細(xì)胞株:通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物成為細(xì)胞株。...

  • 2020

    4-7

    細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)影響生長(zhǎng)的幾點(diǎn)因素細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營(yíng)養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長(zhǎng).一、溫度:一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng).細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時(shí),雖影響細(xì)胞代謝,但并無(wú)傷害作用.把細(xì)胞置于23~25℃時(shí),細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng),但速度減...

  • 2020

    3-19

    什么時(shí)候需要穩(wěn)定細(xì)胞株?以下實(shí)驗(yàn),構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株而不是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染更能滿足實(shí)驗(yàn)要求:1)外源片段在分裂細(xì)胞中長(zhǎng)期(2周)穩(wěn)定表達(dá)。雖然普通轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)一般只能保證2-4天的轉(zhuǎn)染和表達(dá)效率,但腺病毒載體在多數(shù)分裂細(xì)胞中可以維持2-4周內(nèi)的高轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)周期。而非分裂細(xì)胞,可以使用腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)外源基因,因?yàn)橄傧嚓P(guān)病毒載體在許多非分裂細(xì)胞中可以保持長(zhǎng)達(dá)1年的高效表達(dá)。2)需要構(gòu)建使用誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng),這主要是由于:a)過(guò)表達(dá)基因或者干擾目的基因引起細(xì)胞毒性或者抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等不利因素;b...

  • 2020

    3-18

    細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)(入門級(jí))總的原則:無(wú)菌操作、保證細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性按時(shí)間順序整理1、細(xì)胞房和生物安全柜(或超凈工作臺(tái))先開(kāi)紫外照射30min。作用:對(duì)環(huán)境滅菌(空氣)。(備注:如果著急,至少也要開(kāi)15分鐘)在做實(shí)驗(yàn)之前考慮好需要哪些物品。開(kāi)始照射之前,將所需要用到的物品都放到生物安全柜(或超凈工作臺(tái))里面。常用移液槍或電動(dòng)移液器等,需要在工作臺(tái)上放置一套設(shè)備。細(xì)胞培養(yǎng)箱一般都已經(jīng)調(diào)整好。定期留意一下二氧化碳是否足夠。不夠及時(shí)更換。2、顯微鏡需要定期消毒酒精擦拭。注意:顯微...

  • 2020

    3-9

    細(xì)胞養(yǎng)不好?那可能是這些沒(méi)注意到位1、購(gòu)買的細(xì)胞死亡或存活率不佳可能原因?細(xì)胞冷凍管解凍后,為何會(huì)有細(xì)胞數(shù)目太少的情形?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見(jiàn)原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過(guò)程錯(cuò)誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤;細(xì)胞置于–80℃太久。研究人員在冷凍細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻...

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